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病理组织中的病原学检查对结核病的诊断价值分析
樊拂晓   王莉
郓城县人民医院 山东  菏泽  274700
 
【摘要】目的：探究病理组织中的病原学检查对结核病诊断价值。方法：选取2020年2月开始，拟定研究计划，收集相关数据，直至2023年6月截止，共计纳入108例患者参与分析，以患者病理特点进行分组，坏死性肉芽肿组患者60例，非坏死性肉芽肿组患者48例，取患者病理标本，分析病原学检测期间，结核分枝杆菌（MTB）检出率。结果：坏死性肉芽肿组患者MTB检出率更高，P＜0.05。不同病原学检查结果中，Xpert MTB/RIF检出率更高，比较其他检测方法MTB检出率更高，P＜0.05。结论：患者结核病病理形态与MTB病原学检查结果一致，病理组织中Xpert MTB/RIF检出率较高，如患者样本量足够，优先推荐联合检测，便于准确掌握患者疾病情况，值得推荐使用。
【关键词】结核病；病理组织中的病原学检查；诊断价值
 
    肺结核是由结核分枝杆菌引起的传染病，主要影响呼吸系统，特别是肺部。细菌通过空气中的飞沫传播，当患者咳嗽、打喷嚏、说话时，会释放出病菌，其他人通过吸入这些病菌而感染肺结核^[1]。肺结核可分为两种类型，原发性肺结核、继发性肺结核，原发性肺结核常见于儿童、免疫系统较弱的人，患者初次感染MTB时出现的病症。继发性肺结核则是指在原发性肺结核感染后，细菌不活跃一段时间后重新激活，导致再次感染^[2]。肺结核早期症状包括长期咳嗽、咳痰、乏力、发热、夜间出汗等，随着疾病的发展，患者可能出现胸痛、痰中带有脓液、气促、胸部肿块等严重症状。肺结核是严重的传染病，严重影响健康，因此，及时诊断、早期治疗至关重要^[3]。病理组织常通过观察、分析组织标本来确定疾病的诊断、分类，病理组织学的主要任务是揭示疾病的病程、发展过程，了解疾病对组织、器官的影响，并提供临床诊断、治疗的依据^[4]。病理组织主要依赖于组织标本的切片制备、染色、显微镜下的观察，通过检查组织的细胞形态、组织结构以及异常病变的变化，来确定疾病的性质和程度。而病原学检查是一种针对疾病的病原体进行分析、检测的方法。病原学检查的目的是确定疾病的病因，即找出导致疾病发生的病原体，包括细菌、病毒、真菌、寄生虫等。病原学检查可以通过不同的技术手段来达到诊断疾病、指导治疗的目的，常见的病原学检查方法包括细菌培养、病毒抗酸染色、MTB、Xpert MTB/RIF、PCR等^[5]。本文选取我院接诊108例肺结核患者，予以病理组织中病原学检查，详情如下。
 
1 资料与方法
1.1一般资料
选取2020年2月～2023年6月我院临床接诊108例患者，作为研究对象，以病理学特点分组，坏死性肉芽肿组患者60例，男性人数35例，女性人数25例，年龄选取标准20岁～75岁，均数年龄（48.32±3.25）岁，标本采集方式：经皮穿刺21例；手术切除22例；内镜检测17例。标本情况：肺组织25份，淋巴结15份，胸膜组织10份，骨组织4份，胸壁肿物2份，肠黏膜组织2份，皮肤组织2份，非坏死性肉芽肿组患者48例，男性人数28例，女性人数20例，年龄选取标准22岁～76岁，均数年龄（48.41±2.98）岁，标本采集方式：经皮穿刺20例；手术切除21例；内镜检测19例，标本情况：肺组织15份，淋巴结10份，胸膜组织5份，骨组织3份，胸壁肿物3份，肠黏膜组织2份，皮肤组织2份。两组一般资料，组间差异无统计学意义，P＞0.05。
    纳入标准：（1）患者知情、同意本次研究。（2）能够达成有效交流者纳入。（3）研究期间数据来源均为我院接诊，且符合结核病病症诊断标准，具备相关诊断报告、数据等，自愿参与本次研究，同意、授权书齐全。
排除标准：（1）存在严重负性情绪，伴有焦虑、抑郁疾病者排除。（2）存在认知功能障碍者、精神类疾病症状者排除。（3）已参与同类型研究者排除。（4）主动申请退出研究者排除。
1.2方法
标本制作、抗酸染色：首先，将标本进行固定处理，然后进行脱水、透明化处理，使用石蜡进行包埋并切片，然后进行H-E染色，并使用中性树胶进行封固。期间，可以选择含有坏死性肉芽肿、干酪样坏死的组织蜡块来进行切片，在脱蜡后，进行抗酸染色，并设立阳性对照，使用光学显微镜观察，抗酸杆菌会呈现出红色。
    结核分枝杆菌培养：样本采集：MTB可从患者的痰、尿、脑脊液等样本中分离出来。在采集样本时，需要注意避免污染，使用无菌器具采集样本，并尽量避免空气污染。样本处理：采集到的样本需要进行处理，以便分离出MTB。对于痰样本，可以使用离心法将细菌沉淀下来。选择适当的培养基，在不同种类的培养基上生长情况不同。因此，选择适宜的培养基非常重要。常用的结核分枝杆菌培养基包括罗氏培养基、勃氏液体培养基、勃氏固体培养基等。
Xpert MTB/RIF ：样本采集：首先，需要采集患者痰样本进行检测，理想情况下，应该采集晨起的深咳痰样本。检测设备准备：确保Xpert MTB/RIF检测设备处于良好工作状态，检查设备是否已经正确安装、校准和连接。样本处理：将采集到的痰样本使用专用的离心管离心，以分离痰液中的颗粒物，然后，将上清液转移到专门的孵育试管中。添加试剂：根据设备的使用说明，向试管中添加适量的Xpert MTB/RIF试剂，确保试管中的样本与试剂充分混合。装置设备：将添加了样本、试剂的孵育试管正确放置到Xpert MTB/RIF设备中，确保设备的盖子已正确关闭。然后按照设备操作指南操作，启动设备进行检测。结果分析：设备通常会在2个小时内完成检测过程，并自动打印、显示结果。结果解读：根据设备打印、显示的结果以及设备使用说明，判断患者是否为结核菌阳性、结核菌阴性。
    荧光定量PCR：准备样品：将待测标本加入DNA提取液中，通过破碎细胞膜并释放出DNA，随后，在100℃的高温下，将标本和DNA提取液维持10分钟，以使DNA完全解旋成单链，提高PCR反应的效率、准确性。取2微升已经经过处理的DNA溶液加入PCR试管中，PCR试管是进行PCR反应的容器。接着，根据PCR试剂盒的说明书，设置PCR仪的温度和时间参数，开始扩增反应。荧光定量PCR通常涉及多个温度阶段、不同的PCR循环次数，以确保目标DNA的充分扩增。在PCR反应进行的过程中，目标基因的序列将被选择性扩增，扩增反应会引发指定荧光探针的结合，在PCR反应完成后，利用荧光定量PCR仪器测量PCR产物的累积荧光信号，荧光信号的大小与目标序列的初始浓度成正比，通过设定阈值循环数（Ct值），可以计算出目标序列在初始DNA样本中的含量。
    应用器械：美国BD公司生产：荧光定量PCR仪（7500型）；以及分枝杆菌培养仪（MGIT960型）；美国Cepheid公司生产：Xpert MTB/RIF检查仪。以及相关配套试剂盒。
1.3 统计学分析
统计数据SPSS25.0分析，计数（%）表示，检测X²检验，统计资料（±s）表示，行t检验，P＜0.05，存在统计学意义。
2 结果
2.1 不同病原学检查MTB检出率对比
    本次研究坏死性肉芽肿组患者MTB检出率更高，P＜0.05。不同病原学检查结果中，Xpert MTB/RIF检出率更高，比较其他检测方法MTB检出率更高，P＜0.05。详情见表1.
表1 不同病原学检查MTB检出率对比[n（%）]

组别	n	抗酸染色		MTB培养		Xpert MTB/RIF		荧光定量PCR
		人数	占比	人数	占比	人数	占比	人数	占比
坏死性肉芽肿组	60	14	23.33	21	35.00	51	85.00	41	68.33
非坏死性肉芽肿组	48	3	6.25	2	4.16	25	52.08	16	33.33
X2值	-	5.8677		15.1255		13.8575		13.1071
P值	-	0.0154		0.0001		0.0001		0.0002

3 讨论
    病理组织中病原学检查在临床医学中扮演着重要的角色，通过病理组织学检查，了解疾病的病理特征、变化，为疾病的诊断提供依据。病原学检查可以帮助医生确定疾病的病因，指导针对性地治疗。两者的结合可以提高疾病的诊断准确率、治疗效果，为患者提供更好的医疗服务^[6]。抗酸染色在病原学检查中广泛使用的技术，通过观察特定细菌、真菌时起着重要作用，此类染色方法能够帮助专业人员确定病原体的类型，并为诊断、治疗提供必要的信息^[7]。抗酸染色主要用于检测酸杆菌、酸耐受菌，最著名的代表是MTB。该菌株是引起结核病的主要病原体，因此对其进行快速准确的检测非常关键。抗酸染色能够显现酸杆菌的红染色特征，从而帮助医生快速识别出这些致病菌。MTB是引起结核病的主要病原体，在病原学检查中，该菌种的培养起着重要的作用，将病原体从患者的样本中分离出来，并在适当的培养基上进行生长的方法^[8]。MTB的培养可以帮助医生确定是否存在结核病，以及获得关于该菌株的详细信息，包括其抗药性和生物学特性。Xpert MTB/RIF是快速分子诊断试剂，用于结核病病原学检查，使用核酸扩增技术，能够可靠地检测MTB的存在，并同时检测其对利福平的耐药性。具有快速诊断、高度敏感性、耐药性检测、简单易用等优势，省去了样本运输、反复操作的时间、成本，提高了工作效率^[9]。荧光定量PCR是在病原学检查中起到关键作用分子生物学技术，该技术可以对病原体的基因组进行扩增、定量分析，从而确定感染程度、病原体数量，为临床诊断和流行病学研究提供重要依据。检测期间，利用特定的引物、荧光探针，在PCR过程中实时监测靶基因的扩增情况，并通过荧光信号的强度来确定靶基因的初始浓度。由此，不仅可以检测病原体是否存在，还可以量化其数量。本次研究，坏死性肉芽肿组患者MTB检出率更高，P＜0.05。不同病原学检查结果中，Xpert MTB/RIF检出率更高，比较其他检测方法MTB检出率更高，P＜0.05。上述研究与领域内学者方木通，杨倩婷，王仲元^[10]等研究论点近似，联合检测结核病诊断价值更高，且Xpert MTB/RIF技术检出率较为显著，P＜0.05。
    综上所述，联合进行病原学检查MTB检出率高，如病理组织标本充足，优先建议进行联合检测，提高病症诊治效果，便于针对性干预，值得临床推广使用。
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[8]王艳,房宏霞,郑开巧等.2018—2020年深圳市龙华区某综合医院呼吸科加强住院患者结核病病原学检查的效果分析[J].中国防痨杂志,2022,44(04):368-374.
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[10]方木通,杨倩婷,王仲元,等. 病理组织中的病原学检查对结核病的诊断价值[J]. 中华传染病杂志,2021,39(2):92-96.